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牛肝(克倫特羅)

產品時間:2022-03-01

簡要描述:

本制品利用大腸桿菌大規模發酵表達,采用藥用規格原輔料生產,并嚴格控制宿主蛋白質殘留、核酸殘留等,符合 GMP 規范的產品生產與質量管理規程保障生產過程及所有原輔料可追溯。

產品描述:
體外轉錄獲得的mRNA未經細胞內一系列修飾,不具備Cap 結構與PolyA 尾,容易降解,易激活免疫反應,不能與核糖體起始蛋白結合,無法啟動蛋白翻譯,因而在工業化mRNA生產中,需使用牛痘病毒加帽酶對IVT 的mRNA進行加帽修飾,使mRNA的5' 端獲得Cap0 結構,進一步使用2'-O- 甲基轉移酶將Cap0 轉化為Cap1。酶法加帽引入的帽結構與真核生物體內天然帽結構*一致,從根本上降低外源mRNA 免疫原性的同時,保護其不被降解,并提高翻譯效率,增加細胞內蛋白產量。通過酶法加帽最大可獲得100%的加帽效率,而通過化學合成帽類似物結構加帽,其加帽效率相對較低,并且帽類似物結構與天然帽結構有差異。
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferas 可利用 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作為甲基供體, 在 RNA 5′末端緊鄰帽結構(Cap 0)的第一個核苷酸的 2′-O 上添加甲基基團,形成帶有 Cap 1 結構的 mRNA。Cap1 結構能增強 mRNA 的翻譯效率,從而可提高轉染后 mRNA 編碼的蛋白表達水平。該酶只能以帶 7-甲基鳥苷帽結構(m7GpppN)的 RNA 為底物,不會作用于 5′末端為pN、ppN、 pppN 或 GpppN 的 RNA。帶 7-甲基鳥苷帽結構(m7GpppN)的 RNA 可通過 Vaccinia Capping System來制備。 
本制品利用大腸桿菌大規模發酵表達,采用藥用規格原輔料生產,并嚴格控制宿主蛋白質殘留、核酸殘留等,符合 GMP 規范的產品生產與質量管理規程保障生產過程及所有原輔料可追溯。
遵循以下規范生產:
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2.《GMP 附錄-細胞治療產品》國家藥品監督管理局。
3.《人用基因治療總論-中國藥典 2020》國家藥典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于細胞治療,基因治療和組織工程產品中的輔料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 細胞治療產品生產過程中細胞因子和生長因子。
6. Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生產細胞或基因治療藥物的生物來源原料。
產品用途:
Cap0 結構的 mRNA 2′-O 甲基化(Cap1),以提高 mRNA 的翻譯和表達效率。
注意事項:
1. 用于反應的 RNA 在使用之前應進行純化并溶解于 RNase-free water。溶液中不能含有 EDTA 和鹽;
2. 在配置反應體系時,建議使用 RNase 抑制劑以增強反應中 RNA 的穩定性??梢约尤?0.5µl 的 RNase 抑制劑,同時去掉等體積的 RNase-free water;
3. 反應之前加熱 RNA 可以去除 5′端的二級結構。如果轉錄產物的 5′端結構復雜,可以把加熱時間延長至 10 分鐘;
4. SAM 在 pH 7–8, 37°C 條件下不穩定,需要在反應開始之前新鮮配置??墒孪扔嬎愫?SAM 的用量,在反應開始前將 32 mM的儲備液稀釋成 4 mM 的工作液。為避免 SAM 降解,該工作液需要保存于冰上。

 

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